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千亿手机app下载实验动物中心动物安乐死指南

1. 目的

随着生物医学的快速发展,实验动物在各个学科各个领域的应用日益广泛,每年都有数

以千万计的实验动物被用于科学研究,而人们对实验动物福利的关注也日益提升。我国科技

部于2006 年发布了《关于善待实验动物的指导性意见》,是我国第一部规范实验动物福利的

全面系统的法规,对我国国内实验动物繁育、生产、运输、实验提出了善待实验动物的要求。

安乐死是实验动物的关键性福利,也是动物实验中伦理审查的重点。随着人们动物保护意识

的增强和国家实验动物福利伦理标准颁布和实施,实验动物安乐死的规范问题也越来越受到

广泛关注。

千亿手机app下载作为国家211 工程首批入选高校,教育部和江苏省政府共建的“双一流”建设

高校,每年都有大量的科研课题,需要使用大量的实验动物,而千亿手机app下载实验动物中心现有

实验动物实施面积数千平方米,实验动物数十万个。作为从事实验动物行业的专业人员,在

夺走实验动物的生命时,我们应确保给予实验动物最高程度的尊重,尽可能使得实验动物死

亡时无疼痛和无痛苦。我们使用的安乐死技术应该能够迅速导致实验动物丧失意识,随后心

跳和呼吸停止,最终导致大脑功能丧失,并应尽量减少动物在失去意识之前所经历的痛苦和

焦虑,确保动物在安乐死期间的痛苦最小化。在任何情况下,选择最合适的安乐死方法取决

于所涉及的动物种类、可以使用的动物安乐死手段、人员技能、动物数量和其他考虑因素。

2. 安乐死定义

安乐死(euthanasia)一词源于希腊语,“eu”的意思是好的,“thanatos”的意思是

死亡,安乐死指的是“好的死亡”或“平安和有意义的死亡”,也翻译为“无痛苦致死术”。

实验动物的安乐死是指用公认的、人道的方式处死实验动物的过程,使得实验动物能够没有

惊恐或焦虑,能够平静地、没有痛苦地死亡。安乐死方法的最重要的标准是:安乐死应具有

保证实验动物中枢神经系统立即达到死去痛觉的早期抑制作用。在这些准则的背景下,实验

动物安乐死是诱导实验动物人道死亡的行为。

3. 适用范围

1) 活体动物实验结束时(实验终点)

用实验动物进行的科学实验种类非常繁多,目的也各不相同,但相同的是,在活体

动物实验结束时,都需要对实验动物实施安乐死。

2) 人道终点

在动物实验中,不可避免的会对动物造成痛苦或伤害,当动物的痛苦程度超过伦理审

批的预期时,根据动物福利和动物保护的原则,应采取恰当的方法对动物进行安乐死,确保

将实验动物的痛苦降到最低。

当动物实验已经失败,继续实验已经无法得到有意义的结果时,为尽早终止实验动物的

痛苦,同样应实施人道终点,尽快安乐死动物。

3) 其他不适合继续饲养的原因

在动物实验中,出于饲养成本和空间等因素的考虑,经常需要对一些不适合进行实验的

动物进行淘汰,如动物因为性别、年龄、体重、基因型等原因需要淘汰,此时也需对淘汰动

物实施安乐死。

4. 安乐死评估标准

在评估安乐死方法时,我们采用以下标准:

1)必须确保操作人员的安全,在使用挥发性麻醉剂(如乙醚、安氟醚、三氟乙烷)时,必

须远离火源;

2) 必须接受伦理委员会的监管;

3)尽可能在不引起疼痛、痛苦、焦虑或恐惧的情况下诱发实验动物的意识丧失和死亡;

4)诱发实验动物意识丧失所需的时间要尽可能短;

5)选择的安乐死方法须安全、可靠,尽量选择容易操作的安乐死方法;

6)实验动物的死亡过程不可逆转;

7)选择的安乐死方法能够兼顾实验目的,以及兼顾随后的组织评估、检查或使用;

8)实施安乐死时,最好是在实验动物熟悉和安全的环境中,操作须温和、小心,镇静和/

或麻醉是实施安乐死的最佳条件;

9)所用安乐死方法要兼顾实验动物的物种、年龄和健康状况;

10)受惊吓的动物发出痛苦的声音、恐惧的行为和释放某些气味或信息素可能会引起其他动

物的焦虑和恐惧,因此,禁止在同类或者其他动物面前实施安乐死;

11)所使用的安乐死药物合法、安全、可靠、易得并且有使用权限;

12)所用安乐死方法需要仪器设备辅助的,需保持设备能正常工作运转;

13)必须在安乐死后和处置动物之前核实死亡情况,判定动物是否死亡,不仅要观察实验动

物呼吸是否停止,还要观察神经反射、肌肉松弛等状况;

14)必须关注实验动物安乐死对于观察人员和操作人员的情绪影响。

5. 安乐死方法

总体来说,安乐死的方法有三大类:吸入性药物法 (二氧化碳、氮气、一氧化碳、乙醚

等);注射药物法(静脉、腹腔等注射药物);物理方法(颈椎脱臼、断头、放血等)。

1)吸入药物法

吸入药物法主要包括吸入二氧化碳、氮气、一氧化碳、乙醚等吸入性麻醉剂。处死实验

啮齿动物最常用的是二氧化碳法,将实验动物放置在二氧化碳麻醉箱中,二氧化碳会从环境

中进入肺泡,然后通过血液进入实验动物大脑,当大脑中二氧化碳含量到达一定浓度,会导

致意识丧失继而死亡。二氧化碳吸入法简单、安全、有效、廉价、不污染组织和环境。但要

注意的是由于二氧化碳与水发生反应,在湿润组织中生成酸而对动物产生刺痛的感觉,使动

物在丧失意志前感受到痛苦。建议每分钟填充30%-70%麻醉箱体积的二氧化碳。

卤代类吸入麻醉剂如异氟醚、七氟醚、氟烷等也可以用作实验室的啮齿类动物的麻醉剂,

可以作为二氧化碳的替代方案。缺点是当实验动物暴露于致死剂量的麻醉剂时,许多动物会

表现出厌恶和应激行为,并且当实验动物进入吸入性麻醉剂容器中,由于麻醉剂量被容器设

置成亚致死浓度,安乐死的过程非常缓慢;在执行安乐死的过程中,为增加容器内麻醉剂的

浓度,有时会在容器内放入被麻醉剂浸泡过的纱布,刺激性的液体可能会直接接触动物。有

些动物对高浓度的卤代类吸入麻醉剂虽然有一些厌恶,但是不会像应用高浓度二氧化碳那样

诱发疼痛。但需要注意的是,这些挥发性麻醉剂是环境污染物,与二氧化碳相比毒性更大。

2) 注射药物法

通过注射过量的药物,使动物迅速死亡,是非常可靠的动物安乐死方法。 注射性麻醉

剂有多种给药方式,静脉注射是最佳选择。目前在药物选择中,应用过量的巴比妥类及其衍

生物的药物是对动物执行安乐死的优选方法,适宜的动物种类包括啮齿类动物、兔、犬、猫、

非人灵长类动物、猪、牛、马、 两栖动物、爬行动物、家禽等,应用范围较广。巴比妥类

药物会导致意识快速丧失继而呼吸停止,但有些个体注射时会诱发持续的兴奋期继而丧失意

识。由于小动物(如大鼠、小鼠等)静脉注射比较困难,通常会采用腹腔注射巴比妥。但腹

腔注射巴比妥会因其碱性而导致动物腹部扭曲造成疼痛,因此可以在麻醉剂中加入局麻药

(利多卡因)缓解因巴比妥注射而引发的伤害。 对于大动物,较为公认的最好的方法是:

首先给予安定剂,待动物进入安静状态时,再行静脉注射过量的巴比妥酸盐,该法可最大限

度地减少动物的紧张和挣扎。注射巴比妥药物的优点在于可以平稳的诱导并麻醉动物,因为

其效果依剂量、浓度和投药方式而不同,可使动物的不适反应降到最低,失败的可能性低于

物理方法,可以保留完整的身体结构。注射巴比妥类药物的缺点在于此类药品是管制类药物,

需要满足对于获取、存储、使用及记录相关药品的要求。但使用巴比妥类也会引起一些动物

福利问题,包括抓取动物进行注射而导致的应激;在血管周围注射溶液后潜在的疼痛;剂量

没有掌控好,没有进行死亡的验证,有潜在苏醒的可能。这种安乐死方法需要采用辅助的方

法确认动物是否死亡;需要对人员开展准确实施腹腔注射或静脉注射的相关培训。

3)物理方法

物理的安乐死方法主要有颈椎脱位、断头、放血、微波刺激等,物理法只要在良好的技

巧及适当的工具的配合下,能迅速使动物解除疼痛达到死亡。但是未受过训练的人员去实施

物理性方法时,不仅容易造成人员受伤,更可能使动物因未完全死亡而造成极大的痛苦。有

些方法,如放血、脑脊髓穿刺等,不建议作为动物安乐死的单一方法,配合其他方法使用较

好。对于一些小动物(如啮齿动物、禽类、仔兔、鸟 类)断头和颈椎脱位被认定为是可接

受的方法,但其关键在于操作者的技能,因此建议可以配合吸入麻醉使用。为保证动物福利,

实施物理性安乐死方法需要对操作人员进行系统的培训。 相对而言,断头不是理想的方法,

但由于爬行动物和两栖动物的中枢系统对脑缺氧相对不敏感,因此深度麻醉后断头是它们执

行安乐死的一种选择,如对此类动物进行安乐死,应先进行镇静,目的是迅速抑制维持意识

的脑中枢,减少动物痛苦。 目前,国际上可以接受的专业物理方法包括专门微波设备及低

温设备。对于斑马鱼,可将其快速浸入冰水中造成低体温,迅速引发冷休克;对于新生啮齿

类动物,推荐缓慢冷却并在动物运动丧失后采取后续步骤确认死亡。物理方法的优点在于这

种方法通常很便宜,无化学药剂污染组织,执行完成度高,且仅需要很少的设备或不需要设

备,快速;缺点在于对操作者的技术要求较高,如操作技术不佳,恐无法使动物迅速死亡,

而导致动物的更大痛苦;不适用于保持动物头颈部完整的研究;在抓取和保定的时候可能导

致动物紧张。从动物福利角度来说,在物种合理且麻醉合理(如需要)的情况下,物理方法

是合适的安乐死方法,可以避免或减小动物死亡前所承受的不必要的疼痛和痛苦,但是对实

施安乐死的人员感官刺激较大,需要加强实验者的心理培训;并且所有的物理方法均会产生

创伤,对实验动物和操作人员都存在潜在的危险。

5. 安乐死方法推荐

1)小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠

二氧化碳法。将实验动物放入二氧化碳麻醉箱,打开二氧化碳气阀,等动物逐渐丧

失意识后,将二氧化碳浓度升至100%,动物呈现无意识状态,包括无掐指反射或肌张力

缺失或无角膜反射(仅适用于大动物和兔),继续通气2min 以确定动物死亡。

异氟烷麻醉后颈椎脱臼。该方法可以作为二氧化碳的替代方案。以3-5%浓度诱导麻

醉,使动物迅速失去意识,之后对实验动物进行颈椎脱臼/开胸/放血安乐死。

注意事项

a 对于特定品种的动物,宜采用二氧化碳进行安乐死。高压瓶装的二氧化碳是建议使用的设

备,不推荐使用干冰或其他化学方法制造二氧化碳。

b 动物装入容器内时,不可过度拥挤,且不可同时混入不同品种的动物。

c 以低浓度诱导后转入高浓度,使动物迅速失去意识。当动物呈现死亡状态后再持续灌注气

体至少数分钟,将动物从安乐死容器内取出前必须确认动物死亡。可在动物取出后,用其他

方法(脱颈、开胸、放血)对动物进行死亡确认。

d 如动物未死亡,则立即使用其他方法(如颈椎脱臼、断头、开胸)对动物进行安乐死。

e 注意安全,需在通风良好场合进行。

f 二氧化碳吸入可能会诱发动物肺水肿,可能会影响其后研究中对动物组织器官的利用。

2)家兔

家兔可用戊巴比妥钠注射法安乐死,静脉注射为首选给药途径,腹腔、胸腔、心内注射

也可。使用静脉注射100mg/kg 处死家兔,既人道又安全有效。也可用麻醉后注射氯化钾的

方法安乐死,麻醉药物可根据实际选用戊巴比妥钠、陆眠宁、舒泰等,麻醉后耳缘静脉注射

10%氯化钾5mL 即可。

3)犬、猪、猴

一般采用麻醉后注射氯化钾的方法安乐死,麻醉药物可根据实际选用戊巴比妥钠、陆眠

宁、舒泰等,麻醉后耳缘静脉或前肢静脉注射10%氯化钾0.5mL/kg 体重即可。也可使用麻

醉后大量放血致死,同样根据实际选用戊巴比妥钠、陆眠宁、舒泰等麻醉药物,麻醉后切开

实验动物主要大动脉放血致心跳停止。

4)两栖动物、爬行动物、鱼类

两栖动物和鱼类适用于液氮低温冷冻或急速降温的方法,直到动物失去方向,停止鳃盖

运动,再在低温下保持一定时间。除此外,最好再用其他药物如稀释的氯化钠或氯化钙溶液

确认死亡。

6.注意事项

1)动物安乐死时应在远离存活动物的非公开场所执行。

2)执行安乐死所用的药物与仪器设备,应随时保持最佳的使用状态。依据动物品种、体重

及数量,事先准备好足量的药物与设备仪器,并定期维护。

3)所有动物的安乐死,最终步骤须确认动物是否已经完全死亡。应检查动物的心跳是否完

全停止、瞳孔是否放大、掐指无反射、呼吸停止、触摸发凉、躯干僵硬等。以上现像单独出

现都不能被定义死亡。

4)安乐死后及时处理动物尸体,动物尸体库位于401 号楼地下室。

参考资料:

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